肉制品中刚果红的测定BJS 201807
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肉制品中刚果红的测定BJS 201807

肉制品中刚果红的测定BJS 201807


食品产业网 (2018年7月20日10:21)
  1 范围

  本方法规定了肉制品中刚果红的高效液相色谱-串联质谱测定方法。

  本方法适用于肉制品中刚果红的测定。

  原理

  试样经氨水乙醇溶液提取,用正己烷去除提取液中的脂肪后用液相色谱串联质谱法进行测定,外标法定量。

  试剂和材料

  除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯或以上规格,水为GB/T 6682规定的一级水。

  1.1 试剂

  3.1.1 乙腈(C2H3N):色谱纯。

  3.1.2 甲醇(CH3OH):色谱纯。

  3.1.3 乙醇(C2H5OH):色谱纯。

  3.1.4 正己烷(C6H14):优级纯。

  3.1.5 甲酸铵(CH5NO2):色谱纯。

  3.1.6 氨水(NH3•H2O):含量25%~28%。

  1.2 试剂的配制

  3.2.1 氨水乙醇溶液(20+80):移取氨水(3.1.6)20 mL,加入80ml乙醇(3.1.3),混匀备用。

  3.2.2 5mmol/L甲酸铵溶液:称取甲酸铵(3.1.5)0.315 g,加适量的水溶解,定容至1000 mL,混匀。

  1.3 标准品

  刚果红标准样品的分子式、相对分子量、CAS登录号见表1,纯度≥98 %

表1 刚果红标准样品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量



中文名称

英文名称

CAS登录号

分子式

相对分子量

刚果红

Congo Red

573-58-0

C32H22N6Na2O6S2

696.66



  1.4 标准溶液的配制

  称取10 mg(精确到0.1 mg)刚果红标准品于100 mL量瓶中,加入少量甲醇溶解后,用甲醇定容,得到100 μg/mL的标准储备溶液,4℃避光保存6个月。

  仪器和设备

  1.5 液相色谱四极杆串联质谱仪,配电喷雾(ESI)离子源

  1.6 涡旋振荡器

  1.7 组织捣碎机

  1.8 高速离心机,10000 r/min

  1.9 电子天平,感量0.0001g和0.01g

  1.10 旋转蒸发仪

  分析步骤

  1.11 试样制备

  取适量有代表性的试样切成小块,组织捣碎机捣碎,均质分成两份,作为试样和留样,分别装入洁净容器中,密封并标记,于﹣18℃避光保存。

  1.12 样品前处理

  准确称取2 g(精确至0.01g)试样于50 mL离心管中,加入10 mL氨水乙醇溶液(3.2.1),在涡旋振荡器上提取2 min后置于离心机中以5000 r/min离心5 min,把上层提取液溶液全部转移至另一离心管中,用10 mL氨水乙醇溶液重复提取一次,合并提取液。在提取液中加入30 mL正己烷于涡旋振荡器上混合2 min后,5000 r/min离心2 min,弃去正己烷,将下层溶液全部转移至旋蒸瓶中,60 ℃下旋蒸至干,用5mL甲醇溶解残渣。取部分溶解液至离心管中,10000 r/min离心10 min后,取上清液上机测试。

  1.13 仪器条件

  1.13.1 液相色谱条件

  a)色谱柱:C18色谱柱(3.0mm×100mm,3.5μm),或性能相当者;

  b)流动相:流动相A为5 mmol/L甲酸铵水溶液,流动相B为乙腈,流动相梯度洗脱程序见表2;

1 表2 梯度洗脱程序


时间/min

流动相A(%)

流动相B(%)

0

80

20

5.0

20

80

6.0

80

20

8.0

80

20



  c)流速:0.3 mL/min;

  d)柱温:35℃;

  e)进样量:1μL。

  2.1.1 质谱条件

  a)电离方式:电喷雾负离子模式;

  b)检测方式:多反应监测(MRM);

  c)雾化气压力:40 psi;

  d)干燥气温度:320 ℃;

  e)干燥气流速:9.0 L/min;

  f)毛细管电压:4.0kV;

  g)监测离子对、碎裂电压和碰撞能量见表3。

1 表3 刚果红的监测离子对、碎裂电压和碰撞能量



中文名称

监测离子对(m/z)

碎裂电压( V)

碰撞能量(eV)

刚果红

325.0/152.0

130

39

 325.0/416.0 *

130

13


注:*为定量离子对



  3.1 定性确证

  进行样品测定时,如果检出的质量色谱峰保留时间与标准溶液一致,并且在扣除背景后的样品谱图中,各定性离子的相对丰度(k)与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比,最大允许相对偏差不超过表4中规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测组分。

1 表4 定性时相对离子丰度的最大允许偏差



相对离子丰度/%

k>50%

50%≥k>20%

20%≥k>10%

k≤10%

允许的相对偏差/%

±20

±25

±30

±50



  4.1 定量测定

  4.1.1 标准曲线的制备

  将刚果红标准溶液(3.4)用甲醇逐级稀释成0.25µg/mL、1µg/mL、5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL的标准系列溶液,准确称取与试样基质相应的阴性试样2g(精确至0.01g,按5.2操作未检出325.0/152.0和325.0/416.0离子对),分别加入标准系列溶液1mL,与试样同时进行提取,制成最终浓度为0.05、0.2、1.0、2.0、4.0 μg/mL标准系列工作溶液,将标准系列工作液上机测试,建立响应值与浓度的线性拟合方程。标准谱图见附录A。

  4.1.2 试样溶液的测定

  将试样溶液(5.2)按仪器参考条件(5.3)进行测定,得到相应的试样溶液的质量色谱峰面积。根据标准曲线得到试样溶液中刚果红的浓度。

  4.2 空白试验

  除不加试样外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作。

  结果计算

  按下式(1)计算试样中刚果红的含量:

   


  式中:

  X—试样中刚果红的含量,mg/kg;

  C—试样测定液中待测物含量,μg/mL;

  V—试样定容体积,mL;

  m—称取样品量,g;

  f —试样制备过程中的稀释倍数。

  测定结果以平行测定的算术平均值表示,保留2位有效数字。

  灵敏度

  当称样量为2.00 g时,本方法检出限为0.13 mg/kg,定量限为0.45 mg/kg。

  精密度和准确度

  在0.5 mg/kg、1.0 mg/kg及5.0 mg/kg的添加水平下,回收率不低于70%,相对标准偏差不高于10%。

  附录A

  刚果红标准溶液质量色谱图

 图1 100ng/mL刚果红多反应监测(MRM)色谱图  


  本方法负责起草单位:南京市食品药品监督检验院。

  验证单位:江苏省食品药品监督检验研究院、国家肉类食品质量监督检验中心、河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心、北京市食品安全监控和风险评估中心、辽宁省食品检验研究院。

  主要起草人:凌睿、胡文彦、孙小杰、林慧、志刚、马育松。

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